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2022-07-1827418 次瀏覽
劃重點(diǎn)!細(xì)胞非常規(guī)培養(yǎng)技術(shù)干貨大放送

培養(yǎng)基+必需營養(yǎng)物質(zhì)+適合的溫度+適合的pH模擬體內(nèi)環(huán)境是最常見的細(xì)胞體外培養(yǎng)方式,促使細(xì)胞在體外的環(huán)境中正常生長增值。

 



事實(shí)上細(xì)胞在體內(nèi)真實(shí)的生長環(huán)境十分復(fù)雜,許多細(xì)胞在體外平面培養(yǎng)表面會逐步變得更加扁平,分裂異常,并喪失其分化表型。


如何規(guī)避常規(guī)2D培養(yǎng)帶來的細(xì)胞異常風(fēng)險?

2022年了,該懂點(diǎn)3D細(xì)胞培養(yǎng)了!

 

3D培養(yǎng)是什么?

3D細(xì)胞培養(yǎng)是一種在人工創(chuàng)造的環(huán)境中生物細(xì)胞可以在所有三維空間中生長的技術(shù),使細(xì)胞能夠在載體的三維立體空間結(jié)構(gòu)中遷移、生長,構(gòu)成三維的細(xì)胞載體復(fù)合物,3D細(xì)胞培養(yǎng)允許細(xì)胞在體外向各個方向生長,類似于它們在體內(nèi)的生長方式。


3D培養(yǎng)的優(yōu)勢

? 在體外模擬復(fù)雜的組織結(jié)構(gòu)和體內(nèi)形態(tài),接近體內(nèi)正常細(xì)胞生長環(huán)境

? 展示分化等細(xì)胞活動和細(xì)胞間反應(yīng),實(shí)現(xiàn)真實(shí)的細(xì)胞生物學(xué)和功能

? 準(zhǔn)確建立靶組織模型,有效預(yù)測病程和藥物反應(yīng)

? 使用少量細(xì)胞數(shù),實(shí)現(xiàn)快速生長,兼容自動化儀器,降低成本

 

3D培養(yǎng)助手——NEST細(xì)胞小室




細(xì)胞小室在3D細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中是強(qiáng)有力的工具,適用于共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、趨化實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵襲以及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)。

細(xì)胞小室作為通透性支持物可以有效改善極性細(xì)胞的培養(yǎng),允許細(xì)胞從其基底面和頂面分泌和吸收分子,從而以更為自然的方式進(jìn)行代謝,大程度的模擬體內(nèi)環(huán)境以培養(yǎng)某些特殊的細(xì)胞系。

 

NEST細(xì)胞小室?guī)椭爿p松建立起“生理上的細(xì)胞-細(xì)胞與細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)”相互作用,模擬天然組織的特異性!


NEST細(xì)胞小室的優(yōu)勢


? 全規(guī)格孔徑:小至0.4μm,大到8μm,能夠滿足大多數(shù)較大細(xì)胞(如多數(shù)腫瘤細(xì)胞)穿膜的需求。


? 創(chuàng)新的邊緣設(shè)計:便于輕松加樣。




? PC膜:低吸附率,減少小分子蛋白和其他化合物的損失


? PET膜:透明度佳,具有更好的光學(xué)清晰度,方便觀察細(xì)胞狀態(tài)


? 與大部分固定與染色時用的溶劑相容

 

3D培養(yǎng)Transwell實(shí)驗(yàn)細(xì)胞小室使用五大問

 

Q:使用過程中細(xì)胞為什么不轉(zhuǎn)移?

A:很可能是上室混有高濃度血清或者是小室孔徑不對。


Q:細(xì)胞小室培養(yǎng)后的細(xì)胞染色時發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分布不均一?

A:可能有以下3種原因:1. 小室是否平衡放置于孔板中2.細(xì)胞懸液加入時是否局部過多,在使用過程中細(xì)胞懸液要混勻,建議滴加3.小室是否有傾斜或晃動


Q:復(fù)孔間為何差距較大?

A:計數(shù)不準(zhǔn)確或加入多個小室時細(xì)胞發(fā)生沉降現(xiàn)象,使用中每加一個小室后建議重新混勻。


Q:遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞為何未能遷移至基底室?

A:可能有以下2種原因:1.選擇的膜孔徑偏小。在使用前需選擇合適孔徑的膜。2.小室下面的氣泡會妨礙細(xì)胞遷移,導(dǎo)致局部無細(xì)胞遷移。可以先放入小室,再先加培養(yǎng)基,避免氣泡產(chǎn)生。


Q:遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)中,對照組和測試組之間沒有差別

A:可能有以下2種原因:1.使用的膜孔徑大小不合適,太大或太小都會導(dǎo)致細(xì)胞很容易遷過去或者很難遷移。2.小室膜的上層擦拭不充分。一些實(shí)驗(yàn)只需要觀察基底面的細(xì)胞,但是兩面的細(xì)胞會被染上色并檢測到,所以要擦去上層。