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2023-05-042850 次瀏覽
細(xì)胞常用培養(yǎng)基介紹

細(xì)胞培養(yǎng)基是一種必不可少的液體培養(yǎng)基,用于支持和擴(kuò)展細(xì)胞在體外的生長。合成培養(yǎng)基種類很多,常用的有十多種,目前使用最廣泛的是RPMI 1640,MEM,DMEMDMEM/F12

RPMI 1640 培養(yǎng)基:最初為培養(yǎng)小鼠白血病細(xì)胞的需要而制備。開始的配方適合懸浮細(xì)胞的生長,主要針對淋巴細(xì)胞,后經(jīng)幾次改良從RPMI 1630,1634而至1640,其成分較為簡單?,F(xiàn)發(fā)現(xiàn)它適應(yīng)于多種類型細(xì)胞的生長,包括腫瘤細(xì)胞以及很多正常組織細(xì)胞體外培養(yǎng)。

MEM 培養(yǎng)基:是最低必需培養(yǎng)基,主要是貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),修改配方后也可用于其他類型細(xì)胞培養(yǎng),例如如無鈣(CaMEM培養(yǎng)基可被用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),而Hanks平衡鹽的MEM培養(yǎng)基可被用于二倍體細(xì)胞的培養(yǎng)。

DMEM 培養(yǎng)基:DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量,同時又分為高糖型(4500mg/L)和低糖(1000mg/L)。而MEM中葡萄糖含量1000mg/L。低糖的酵母適合在7%以下的糖濃度中生存,而高糖的酵母適合在7%以上糖濃度中生存。DMEM-高糖型適合生長較快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞,克隆細(xì)胞,也可用于DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng);高糖型使細(xì)胞生長過快,不利于融合細(xì)胞的染色體穩(wěn)定,做單抗細(xì)胞融合時,一般使用低糖型,DMEM-低糖型主要用于干細(xì)胞的培養(yǎng)。

DMEM/F12(11) 培養(yǎng)基:DMEM培養(yǎng)基營養(yǎng)成分濃度較高,F12培養(yǎng)液成分復(fù)雜,含有多種微量元素。DMEMF1211結(jié)合,稱為DMEM/F12培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下細(xì)胞培養(yǎng),常用于細(xì)胞的克隆生長及干細(xì)胞培養(yǎng)。

Neurobasal:這是一種專為神經(jīng)細(xì)胞設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基,適用于神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)。

培養(yǎng)基的顏色主要是酚紅來顯示的,酚紅指示顏色非常靈敏,p值范圍為6-8,顏色由黃變?yōu)樽霞t。酚紅不是必須的,在有些情況下甚至是多余的,酚紅有類似固醇類激素的作用,如果涉及到固醇類激素相關(guān)的細(xì)胞培養(yǎng),最好不要添加。但是為了培養(yǎng)方便,能讓我們直觀地感覺培養(yǎng)液的狀況,加入酚紅后,如果培養(yǎng)液偏酸了,就顯示偏黃色,偏堿性了就顯示偏紫色。另外在做流式細(xì)胞的時候,酚紅會對結(jié)果產(chǎn)生影響,因此也不要添加。

 

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,檢查培養(yǎng)液顏色和透明度變化,顏色變黃,說明pH下降;變紅或紫紅色,說明pH上升,細(xì)胞生長停滯、死亡,一般生長穩(wěn)定的細(xì)胞2-3天換液一次,生長緩慢的細(xì)胞可3-4天換液一次。一旦新鮮的培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素,建議1周內(nèi)使用完。只有充分了解培養(yǎng)基,才能養(yǎng)好細(xì)胞!