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實驗時刻
軟瓊脂克隆實驗
軟瓊脂克隆形成又名非錨定依賴性生長實驗(Anehorage-independentassay),利用軟瓊脂為培養(yǎng)介質(zhì),使細胞在懸浮狀態(tài)下生長。
軟瓊脂克隆形成實驗方法簡單,適用于貼壁生長的細胞。
細胞克隆形成率表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數(shù)量,主要反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。
Part 01.
實驗材料
Part 02.
實驗操作流程
常見問題與解答
A:細胞接種密度與最終實驗結果密切相關,若細胞太多,形成克隆數(shù)目太多,處理結果時數(shù)克隆不僅容易出錯,而且圖片很難看(下圖左)。細胞太少,不能形成克隆。如下圖所示:
上圖我們看到3株癌細胞在6孔板克隆形成圖片,第一個明顯鋪板細胞太密集,導致難以統(tǒng)計數(shù)據(jù);中間那個正好,最后面那個細胞數(shù)量偏少,且細胞鋪板不均勻。因此,為了獲得美觀的圖片和準確的數(shù)據(jù),第一次實驗最好設置細胞接種梯度,如500-1000-2000-5000個/孔挑選出最合適的接種密度。細胞在進行克隆形成實驗時要求有95%以上的分散度,否則結果的準確度會受到很大影響;另外注意細胞計數(shù)時建議多計數(shù)幾次。
A:并非每種細胞都可以形成克隆,克隆形成率與細胞本身增殖能力有關。還與接種細胞密度,加入培養(yǎng)液的體積、血清濃度有關。因該實驗處理時間較長,應給細胞多加培養(yǎng)基,如每孔4ml,或者3天更換一次培養(yǎng)基,以供給細胞充足的營養(yǎng)。
END